|
Получение рекомбинантного гликопротеина gp70 вируса кошачьего
лейкоза (FeLV )
 Получение
рекомбинантного гликопротеина gp70 вируса лейкоза кошек с использованием
бакуловирусной системы экспрессии.
Вирус лейкемии кошек (feline leukaemia virus (FeLV) это ретровирус
млекопитающих, который вызывает опасное заболевание, широко распространенное
во всем мире – лейкемию кошек. Исследования, проведенные в ряде районов
Российской Федерации, свидетельствуют о том, что количество кошек,
инфицированных вирусом лейкемии, сравнимо со среднестатистическими
данными по Европе и колеблется в группах “риска” (бродячие животные,
кошки из приютов и питомников) от 12 до 23% Так в Германии количество
инфицированных животных составляет 13,4% (Fuchs A. Z. et all. 1994),
в Италии – 18 % (Bandecchi P. Q. Et all 1992), в Испании до 30,4%
(Aijona A. et.all 2000). Известно, что вакцинация животных против
FeLV является основным средством профилактики лейкемии кошек.
В России в настоящее время отсутствуют отечественные вакцины против
этой инфекции. В данной работе представлены данные по получению гликопротеина
gp70 вируса лейкоза кошек, как компонент для будущей рекомбинантной
вакцины.
Для работы были
взяты сыворотки крови от кошек с диагнозом лейкемия, подтвержденным
исследованиями методом иммуноферментного анализа. (FeLV-testKit,
ELV, Нидерланды). Для определения FeLV в сыворотке крови были
подобраны диагностические праймеры для “гнездовой” ПЦР. После
проведения диагностического теста, получали фрагмент длиной 365
п.н. на участок генома вируса FeLV 6087-7322 п.н. Из сывороток,
с наибольшим содержанием РНК FeLV, амплифицировали полную последовательность
гена gp70.
Для подбора праймеров использовали первичную последовательность гена
gp70 штамма “Rickard” (NCBI, Genebank, AF0527239). Ген был последовательно
клонирован в плазмидный вектор pGEM-T Easy и донорный вектор pFastbacHTa
бакуловирусной системы экспрессии Bac-to-Bac (Life Technology, США).
Полученная рекомбинантная плазмида была использована для получения
рекомбинантной бакмиды. После трансфекции рекомбинантной бакмидой
клеток насекомых Sf-21 получили экспрессию рекомбинантного белка gp70,
несущего на N-конце 6 аминокислотных остатков гистидина. Такая конструкция
позволяет очистить рекомбинантный белок на Ni-колонке. Очищенный рекомбинантный
гликопротеин был проверен иммуноферментным анализом с использованием
моноклональных антител “3-17” полученных к gp70 (ELV, Нидерланды).
Полученный рекомбинантный белок будет использован как часть рекомбинантной
вакцины против FeLV.
|
|
