Особенность полимеразной цепной реакции в реальном времени – возможность регистрации результата ПЦР в процессе реакции, в каждый момент времени.
Для выявления продуктов амплификации в режиме реального времени используют ДНК-зонд (короткий одноцепочечный фрагмент ДНК размером 26 нуклеотидов, синтезированный химическим путем), комплементарный внутреннему участку – фрагменту ДНК цирковируса свиней II типа. К зонду присоединены два химических соединения или две молекулы: флуоресцентная метка и гаситель флуоресценции. В ходе ПЦР происходит разрушение зонда, разъединение флуоресцентной метки и гасителя, что приводит к появлению свечения. Регистрируя интенсивность свечения, можно узнать о ходе реакции без дополнительной стадии – электрофореза.
Существенным преимуществом является то, что регистрация флуоресценции происходит в закрытой пробирке, т.е. полностью исключается контаминация продуктами ПЦР.
Тест-система позволяет дифференцировать цирковирус свиней II типа от цирковируса свиней I типа, который является контаминантом клеточных линий и не приводит к патологии у животных.
|